一种聚对苯二甲酸乙二醇酯聚酯水解酶突变体及其应用

    公开(公告)号:CN117904075A

    公开(公告)日:2024-04-19

    申请号:CN202211272144.3

    申请日:2022-10-18

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种聚对苯二甲酸乙二醇酯聚酯水解酶突变体及其应用,属于生物技术领域。为了解决聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)聚酯水解酶主要水解产物(TPA和MHET)检测手段匮乏,现有检测手段费时费力的问题,本发明公开了一种筛选PET塑料水解酶的方法。随后以DuraPETase‑4M作为起始突变体进行筛选。结果显示,在PET塑料水解酶反应过程中随着水解产物的积累,pH值随之显著下降,添加终浓度10μM的pH敏感荧光探针可将水解产物浓度与荧光强度形成偶联。筛选得到的A89S/R90T突变体的蛋白表达量为突变前的1.5倍,A89P/R90P/S92K突变体PET水解能力为突变前的1.3倍。使用pH敏感荧光探针作为筛选标记,简化了PET聚酯塑料水解过程中产物的检测流程,使检测过程快速且高效。

    一种提高D-阿洛酮糖3-差向异构酶异源表达水平的方法

    公开(公告)号:CN115386578A

    公开(公告)日:2022-11-25

    申请号:CN202110563627.8

    申请日:2021-05-24

    Applicant: 江南大学

    Abstract: 本发明公开了一种提高D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶异源表达水平的方法,属于生物工程技术领域。通过改造PamyE启动子分解代谢物响应元件(Catabolite responsive element,CRE)区域以提高枯草芽孢杆菌外源蛋白表达水平,及其在D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶(DPEase)异源表达中的应用。对启动子PamyE的CRE区域进行分子改造,可缓解B.subtilis的碳分解代谢物阻遏(Carbon catabolite repression,CCR)效应,提高碳源利用率与目的蛋白的表达量,其DPEase表达量为未改造组的97.9%~349.5%。

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