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公开(公告)号:CN119061036A
公开(公告)日:2024-12-03
申请号:CN202410944666.6
申请日:2024-07-15
Applicant: 中国水产科学研究院珠江水产研究所
IPC: C12N15/62 , C07K19/00 , C12N15/70 , C12N1/21 , A61K39/15 , A61K39/02 , A61K39/295 , A61K39/39 , A61P31/14 , A61P31/04 , A61P7/04 , A61P37/04 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种草鱼出血病和败血症二联亚单位疫苗的制备和应用。本发明提供了一种由GCRV的VP6蛋白和维氏气单胞菌的ompAII蛋白连接获得的融合基因,将该融合基因表达融合蛋白联合佐剂构建二联亚单位疫苗对实验动物进行腹腔注射免疫,采集脾脏和肾组织,测定各组织中免疫相关基因的表达量水平;结果表明所制备的二联亚单位疫苗通过注射免疫能够刺激鱼体不同免疫组织产生免疫应答反应;在免疫后第28d,腹腔注射GCRV强毒及维氏气单胞菌进行鱼体攻毒实验,攻毒后15天,对维氏气单胞菌和草鱼呼肠孤病毒感染相对存活率分别为85%和55%,表明本发明二联亚单位疫苗对养殖草鱼重要病害均具有较好的保护效果。
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公开(公告)号:CN118255850B
公开(公告)日:2024-11-29
申请号:CN202410354739.6
申请日:2024-03-27
Applicant: 中国水产科学研究院珠江水产研究所
Abstract: 本发明涉及生物医药技术领域,特别是涉及一种具有广谱免疫保护作用的维氏气单胞菌重组外膜孔蛋白及应用。本发明从维氏气单胞菌总外膜蛋白Omps中筛选出一种具有广谱免疫保护作用的外膜孔蛋白Porin OmpA,重组的外膜孔蛋白具有良好的抗原性,与油佐剂按适当比例乳化后,免疫草鱼等淡水鱼,能提高草鱼等淡水鱼抵抗维氏气单胞菌和嗜水气单胞菌2种细菌的能力,具有广谱免疫保护效果。该外膜孔蛋白及其基因核苷酸序列可作为淡水鱼细菌性败血症基因工程亚单位疫苗和核酸疫苗进一步研究开发。
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公开(公告)号:CN116836912B
公开(公告)日:2024-03-01
申请号:CN202310765642.X
申请日:2023-06-26
Applicant: 中国水产科学研究院珠江水产研究所
Abstract: 本发明公开了一种大口黑鲈吻端细胞系及其构建方法和应用;所述细胞系的保藏编号为CCTCC NO:C2023121;该细胞系的染色体为56条,为永久细胞系,可以无限增殖,并可对其进行冷冻保存;而且YL03‑S细胞对大口黑鲈易感的LMBV、ISKNV、MSRV均非常敏感,用此细胞系扩增这三种病毒的增殖量显著高于大口黑鲈心肌细胞系、鳜鱼脑细胞系CPB,可以用于大口黑鲈易感病毒疫苗的研发中;还可用于表达外源基因进行基因功能的研究;该细胞系的建立在丰富大口黑鲈细胞库的同时可为水产动物病毒性疾病的病原分离、培养、检测提供保障,还可为开展大口黑鲈易感病毒的感染途径、感染机理以及研制病毒疫苗等提供了便利。
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公开(公告)号:CN116731203A
公开(公告)日:2023-09-12
申请号:CN202310520431.X
申请日:2023-05-09
Applicant: 中国水产科学研究院珠江水产研究所
IPC: C07K19/00 , A23K10/18 , A23K20/147 , A23K20/153 , A23K50/80 , C12N15/62 , C12N15/74 , C12N1/21 , A61K39/15 , A61K39/385 , A61P31/14 , C12R1/01
Abstract: 本发明属于基因工程及分子免疫学技术领域,具体涉及一种融合表达GCRV VP4和LTB的重组乳酸菌及其制备方法与应用。本发明提供了一种融合蛋白,包含GCRV VP4蛋白和大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位蛋白;通过大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位蛋白可以进一步提升VP4蛋白被肠黏膜免疫组织抗原呈递细胞直接识别并呈递抗原,激活先天性免疫Toll样受体信号转导,提高免疫相关基因(IFNα、TLR3、TLR5、MyD88、NF‑κB、Mx、IRF3、IRF7、MHCII、IL‑1β和/或IL‑8基因)表达水平,增强鱼体抗病毒能力。
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公开(公告)号:CN108866008B
公开(公告)日:2020-03-31
申请号:CN201810680288.X
申请日:2018-06-27
Applicant: 中国水产科学研究院珠江水产研究所
IPC: C12N5/20 , C07K16/08 , G01N33/577 , G01N33/535
Abstract: 本发明公开了抗锦鲤疱疹病毒的单克隆抗体制备方法及其应用,本发明制备的抗锦鲤疱疹病毒的单克隆抗体是由保藏编号为CCTCC NO:C201887的小鼠杂交瘤细胞株分泌产生的,单克隆抗体的效价为1:1.28×105;杂交瘤细胞株活性高,可识别锦鲤疱疹病毒结构蛋白,特异性强。并在此的基础上建立了检测锦鲤疱疹病毒的夹心ELISA检测方法,其最低检测浓度为3.923ng/mL,利用上述单克隆抗体建立了检测锦鲤疱疹病毒的间接夹心ELISA试剂盒,可用于大规模锦鲤疱疹病毒的检测,具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号:CN108865974B
公开(公告)日:2019-11-26
申请号:CN201810669284.1
申请日:2018-06-26
Applicant: 中国水产科学研究院珠江水产研究所
Abstract: 本发明公开了一种罗非鱼脑细胞系的构建方法,其步骤是:取鲜活罗非鱼消毒取脑组织,剪碎块,用胶原酶处理后,加入胰蛋白酶;用含培养液充分悬浮,进行原代培养;细胞长满瓶底时,用胰酶‑EDTA消化,接种传代培养;传代培养60代后,于对数生长期加入秋水仙素处理并进行核型分析。本发明公开的罗非鱼脑细胞系的制备方法,方法简单方便;并且用该方法制备的罗非鱼脑细胞系,可以进行长时间的传代培养,对罗非鱼出血病病毒非常敏感,可以广泛应用于实验中。
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公开(公告)号:CN108020664A
公开(公告)日:2018-05-11
申请号:CN201711274976.8
申请日:2017-12-06
Applicant: 中国水产科学研究院珠江水产研究所
IPC: G01N33/569 , G01N33/533
Abstract: 本发明涉及一种检测II型草鱼呼肠孤病毒疫苗中病毒含量的试剂盒及方法,进一步地涉及活疫苗或灭活疫苗(病毒灭活前)的病毒含量的测定,所述试剂盒包括用于检测基因II型GCRV VP41的血清抗体、FITC标记的羊抗兔IgG、阳性对照样品、固定液和PBS洗液。检测方法为将活疫苗或灭活疫苗(病毒灭活前)进行梯度稀释后接种于PSF细胞,连续培养完成后再用本发明所述的试剂盒进行免疫荧光检测,将检测结果进行计算得出相应的病毒含量。本发明的试剂盒及方法灵敏度高、特异性强,且能定量检测活病毒。
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公开(公告)号:CN106866796A
公开(公告)日:2017-06-20
申请号:CN201710067886.5
申请日:2017-02-07
Applicant: 中国水产科学研究院珠江水产研究所
CPC classification number: C07K14/005 , A61K39/00 , C07K16/10 , C12N2720/12022 , C12N2720/12034
Abstract: 本发明公开了一种草鱼呼肠孤病毒Ⅱ型S9基因编码的重组蛋白及其应用。所述重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示,编码该蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明获得的重组蛋白具有较好的免疫原性,与GCRV其它结构蛋白相比,其诱导免疫动物产生的特异性抗体效价更高。进一步试验表明,用VP6蛋白免疫草鱼,可使草鱼诱导产生较高的特异性抗体,并能对草鱼呼肠孤病毒强毒株的攻击起到一定的免疫保护作用。因此,对GCRV Ⅱ型VP6蛋白的研究和应用,对开发草鱼出血病新型疫苗及免疫学检测试剂盒具有极其重要的意义,为草鱼出血病提供新的有效解决途径。
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公开(公告)号:CN104388588B
公开(公告)日:2017-02-15
申请号:CN201410633166.7
申请日:2014-11-11
Applicant: 中国水产科学研究院珠江水产研究所
Abstract: 本发明公开了一种Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒NASBA-ELISA检测引物、探针及试剂盒。所述引物及探针的核苷酸序列如SEQ ID NO.1~4所示。所述试剂盒中含有引物、探针、NASBA扩增缓冲液,酶混合液,扩增产物检测试剂,阴性对照和阳性对照。本发明的Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒NASBA-ELISA 检测试剂盒检测时间周期短、检测效率高;检测病毒特异性高,准确率高;在进行病毒定性分析的同时还能进行病毒定量分析;检测灵敏度比普通PCR高;操作简单、易于推广;实验结果重复性好。
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公开(公告)号:CN104004842A
公开(公告)日:2014-08-27
申请号:CN201410229181.5
申请日:2014-05-27
Applicant: 中国水产科学研究院珠江水产研究所
Abstract: 本发明公开了一种同时检测水生动物败血症三种致病菌的多重PCR引物组及方法。本发明检测方法根据嗜水气单胞菌,维氏气单胞菌和鮰爱德华氏菌,分别设计和筛选出了三对特异性引物,通过多重PCR反应可以快速准确地检测水生动物败血症中的嗜水气单胞菌、维氏气单胞菌和鮰爱德华氏菌。本发明可以同时检测水生动物败血症的三种病原菌,检测所需时间短、灵敏度高、特异性好,与常规病原诊断方法相比更加快捷、经济,因此,可以用于水生动物败血症病的快速诊断和大规模的分子流行病学调查。
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