公开(公告)号：CN104962580A

公开(公告)日：2015-10-07

申请号：CN201510371509.1

申请日：2015-06-30

Applicant: 浙江大学

Inventor： 李正和 ,  马晓楠 ,  王强 ,  钱莎莎 ,  孙凯 ,  周雪平

IPC: C12N15/83 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种重组植物弹状病毒载体及其构建方法。重组植物弹状病毒载体，包括：a）一个修饰的植物弹状病毒基因组；b）一个新引入的转录单元，它被插入植物弹状病毒基因组中表达异源的核酸序列；c）一个异源核酸序列，它被置换到所述的重组植物弹状病毒的糖蛋白转录单元，其中所述的重组植物弹状病毒具有复制和侵染能力，所述的异源核酸序列编码一个抗原性多肽或其它蛋白。本发明病毒表达载体是第一个能在植物上表达外源蛋白的负义RNA病毒载体，具有表达量高，表达稳定性好，可以插入较长的外源基因片段，且插入的外源基因片段不易丢失等方面的特点，可以用于表达多种外源蛋白，也可以用于制备动物疫苗，具有广阔的应用价值和应用前景。

公开(公告)号：CN1425771A

公开(公告)日：2003-06-25

申请号：CN02159876.2

申请日：2002-12-24

Applicant: 浙江大学

Inventor： 周雪平 ,  李正和 ,  陶小荣 ,  谢艳 ,  崔晓峰

IPC: C12N15/34 ,  C12N15/83 ,  C12N15/87 ,  A01H1/00

Abstract: 本发明公开了一种烟草曲茎病毒DNAβ分子、表达载体及外源基因表达方法。该烟草曲茎病毒DNAβ分子全基因组序列与SEQ ID No.5～No.8中任意一个序列至少有70％的同源性。本发明提供的表达载体是以一种粉虱传双生病毒—烟草曲茎病毒(TSCV)的卫星DNAβ作为表达载体，可以对外源蛋白进行有效表达。本发明进一步提供了一种以植物为生物反应器表达外源基因的方法，它以TSCV的卫星—DNAβ作为表达载体，通过构建含外源基因的重组卫星DNA，接种植物并表达外源基因，或接种植物组织、植物细胞培养物，在组织培养条件下表达外源基因。

公开(公告)号：CN115397997A

公开(公告)日：2022-11-25

申请号：CN202180007363.6

申请日：2021-02-23

Applicant: 浙江大学

Inventor： 李正和 ,  马晓楠 ,  王硕 ,  彭幸幸

IPC: C12N15/83 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种利用植物弹状病毒载体对植物染色体DNA进行定点修饰的方法及病毒载体组合物。本发明提供了对植物基因组目的DNA进行定点编辑的方法，该方法无需引入选择性标记基因，包括如下步骤：利用植物弹状病毒载体系统侵染植物并表达序列特异性的核酸酶，所述序列特异性核酸酶靶向所述被侵染植物基因组靶位点并切割靶位点，植物的DNA修复机制完成对所述靶位点的定向编辑。本发明利用植物弹状病毒表达载体递送序列特异性核酸酶，不仅提高了对靶位点的编辑效率，而且可获得非转基因的可稳定遗传的编辑植株。

公开(公告)号：CN115216486A

公开(公告)日：2022-10-21

申请号：CN202210424961.X

申请日：2022-04-21

Applicant: 浙江大学

Inventor： 李正和 ,  刘倩 ,  赵承露

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/55 ,  C12N15/113 ,  C12N5/10 ,  A01H4/00 ,  A01H5/00 ,  A01H6/82 ,  A01H6/54 ,  A01H6/60 ,  A01H6/34

Abstract: 本发明公开了一种利用负链RNA病毒载体对植物遗传物质进行定点修饰的方法及病毒载体系统。本发明提供了对植物基因组目的DNA进行定点编辑的方法，无需对待修饰的植物进行稳定的遗传转化，包括如下步骤：利用番茄斑萎病毒载体侵染植物并瞬时表达序列特异性的核酸修饰酶，所述序列特异性核酸修饰酶靶向所述被侵染植物基因组靶位点并切割或修饰靶位点，植物的DNA修复机制完成对所述靶位点的定向修饰。本发明利用RNA病毒载体递送序列特异性核酸修饰酶，不仅提高了对靶位点的编辑效率，而且可获得非转基因的编辑植株。

公开(公告)号：CN111849927B

公开(公告)日：2022-07-08

申请号：CN202010599526.1

申请日：2020-06-28

Applicant: 浙江大学

Inventor： 李正和 ,  马晓楠 ,  王硕

IPC: C12N7/01

Abstract: 本发明公开了高效产生重组不分节段负义RNA病毒的方法及重组病毒，所述的方法包括向敏感细胞内导入或表达含有一种不分节段负义RNA病毒基因组的核酸分子，病毒核心蛋白核酸分子、以及双链RNA拮抗因子核酸分子。利用本发明提供的方法，可明显提高不分节段负义RNA病毒拯救效率。本发明还提供了利用所述方法对重组不分节段负义RNA病毒进行核酸置换、缺失、插入等遗传操作，构建侵染性重组病毒。

公开(公告)号：CN1291023C

公开(公告)日：2006-12-20

申请号：CN02159876.2

申请日：2002-12-24

Applicant: 浙江大学

Inventor： 周雪平 ,  李正和 ,  陶小荣 ,  谢艳 ,  崔晓峰

IPC: C12N15/34 ,  C12N15/83 ,  C12N15/87 ,  C12Q1/68

Abstract: 本发明公开了一种烟草曲茎病毒DNAβ分子、表达载体及外源基因表达方法。该烟草曲茎病毒DNAβ分子全基因组序列与SEQ ID No.5～No.8中任意一个序列至少有70%的同源性。本发明提供的表达载体是以一种粉虱传双生病毒——烟草曲茎病毒(TSCV)的卫星DNAβ作为表达载体，可以对外源蛋白进行有效表达。本发明进一步提供了一种以植物为生物反应器表达外源基因的方法，它以TSCV的卫星——DNAβ作为表达载体，通过构建含外源基因的重组卫星DNA，接种植物并表达外源基因，或接种植物组织、植物细胞培养物，在组织培养条件下表达外源基因。

公开(公告)号：CN1425772A

公开(公告)日：2003-06-25

申请号：CN02159877.0

申请日：2002-12-24

Applicant: 浙江大学

Inventor： 周雪平 ,  陶小荣 ,  谢艳 ,  李正和 ,  李桂新

IPC: C12N15/83 ,  C12N15/34 ,  C12Q1/68 ,  C12Q1/70

Abstract: 本发明公开了一种新型植物DNA病毒载体及其用途。本发明提供的植物DNA病毒载体包括中国番茄黄化曲叶病毒DNA－A和DNAβ的侵染性载体及由它衍生的植物基因沉默载体和病毒表达载体。本发明还提供了一种新型的构建植物DNA病毒载体的卫星DNA分子，它与Seq ID No.1－12至少有72％的同源性。本发明还提供一种利用植物DNA病毒载体进行病毒功能基因组研究、植物功能基因组研究和外源蛋白表达的用途及其方法。本发明为研究病毒基因组结构、功能和表达调控机制以及病毒与植物间互作提供了一个至关重要的平台，为研究植物功能基因组提供了一种优良的工具，并为利用植物作为生物反应器表达外源蛋白建立了技术平台。