一种稳定表达HBV耐药变异株细胞系及其用途

    公开(公告)号:CN103361315A

    公开(公告)日:2013-10-23

    申请号:CN201210103603.5

    申请日:2012-04-10

    Inventor: 张继明 张轶俊

    Abstract: 本发明属生物技术、微生物动物细胞系领域,涉及一种能够稳定表达HBV耐药变异株细胞系及其用途。本发明采用HBV真核表达质粒pREP-HBV-WT,定点诱变为阿德福韦耐药基因型A181V后插入切除RSV启动子的pREP10构建成HBV真核表达质粒pREP-HBV-A181V,转染HepG2细胞后通过潮霉素筛选,建立耐药HBV细胞克隆株HepG2.HS181V。该细胞株的保藏编号:CGMCC No.5829,分类命名:人肝癌细胞株。该耐药HBV细胞克隆株能持续表达HBsAg及HBeAg,胞内有HBV复制,并可以产生感染性HBV颗粒。该细胞系HepG2.HS181V表达HBsAg及HBeAg明显高于Hep2.2.15,细胞上清HBV颗粒水平低于HepG2.2.15。能用于筛选抗药物、研究HBV生物学特点及其与细胞间相互作用的HBV细胞模型的建立。

    一种乙肝病毒载体及其应用
    12.
    发明公开

    公开(公告)号:CN114107377A

    公开(公告)日:2022-03-01

    申请号:CN202110031557.1

    申请日:2021-01-11

    Abstract: 本发明属于生物医药领域,涉及一种乙肝病毒载体及其用途。具体而言,本发明包括一种突变型乙型肝炎病毒表达载体,使用该乙型肝炎病毒表达载体制备的体外高感染感性C基因型乙肝病毒株。本发明的乙型肝炎病毒表达载体含有缺失5’端前S1区编码序列的C基因型乙型肝炎病毒的编码序列。试验表明,该表达载体可用于制备高感染性的C基因型乙型肝炎病毒分离株,可以用于基于体外感染实验的C基因型HBV与宿主的相互作用、cccDNA的形成和降解及抗HBV药物的筛选等相关研究。

    一种乙型肝炎病毒cccDNA的数字微滴PCR检测方法及其试剂盒

    公开(公告)号:CN108441578A

    公开(公告)日:2018-08-24

    申请号:CN201710080657.7

    申请日:2017-02-15

    Abstract: 本发明属生物技术领域,涉及一种检测乙型肝炎病毒共价闭合环状脱氧核糖核酸的方法以及试剂盒。本发明采用专用组织DNA提取试剂盒提取HBV DNA,并采用选择性荧光定量PCR技术对乙型肝炎病毒cccDNA进行检测,核酸提取后,采用PSAD酶处理,及采用数字微滴PCR方法扩增目的基因并直接定量,提高检测灵敏性和特异性,检测结果表明,能对HBVcccDNA进行准确定量分析,明显优于一般方法,具有特异性好,灵敏度高,定量准确,快速简便,重复性好的特点,本发明的方法及试剂盒可用于HBVcccDNA检测,也可作为临床实验室对HBV感染的辅助诊断方法和临床治疗效果的监测手段。

    PPAR-γ其配体在制备治疗眼科疾病药物中的用途

    公开(公告)号:CN103893177B

    公开(公告)日:2016-12-28

    申请号:CN201210580974.2

    申请日:2012-12-27

    Abstract: 本发明属医药领域,涉及PPAR-r其配体在制备治疗眼科疾病药物中的新用途,本发明采用外源性PPAR-r配体罗格列酮,匹格列酮或酪氨酸衍生物,通过在眼部视网膜缺血再灌注损伤动物模型中试验研究,结果表明PPAR-r其配体,尤其是匹格列酮能显著改善视功能,抑制胶质细胞活化所引起的视网膜炎症反应,对抗缺血再灌注所引起的视网膜细胞凋亡,可制成治疗眼部缺血性及视神经损伤疾病的药物,用于治疗包括青光眼急性大发作,糖尿病视网膜病变,高血压视网膜病变,视网膜血管栓塞,早产儿视网膜病以及影响视网膜血流量的眼科手等疾病,进一步改善视功能。

    PPAR-γ其配体在制备治疗眼科疾病药物中的用途

    公开(公告)号:CN103893177A

    公开(公告)日:2014-07-02

    申请号:CN201210580974.2

    申请日:2012-12-27

    Abstract: 本发明属医药领域,涉及PPAR-r其配体在制备治疗眼科疾病药物中的新用途,本发明采用外源性PPAR-r配体罗格列酮,匹格列酮或酪氨酸衍生物,通过在眼部视网膜缺血再灌注损伤动物模型中试验研究,结果表明PPAR-r其配体,尤其是匹格列酮能显著改善视功能,抑制胶质细胞活化所引起的视网膜炎症反应,对抗缺血再灌注所引起的视网膜细胞凋亡,可制成治疗眼部缺血性及视神经损伤疾病的药物,用于治疗包括青光眼急性大发作,糖尿病视网膜病变,高血压视网膜病变,视网膜血管栓塞,早产儿视网膜病以及影响视网膜血流量的眼科手等疾病,进一步改善视功能。

    基于HepG2HBVrtS202GETV耐药变异株细胞系及其建立方法

    公开(公告)号:CN103820392A

    公开(公告)日:2014-05-28

    申请号:CN201210469842.2

    申请日:2012-11-18

    Inventor: 张轶俊 张继明

    Abstract: 本发明属生物技术、微生物动物细胞系领域,具体涉及基于HepG2?HBV?rtS202G?ETV耐药变异株细胞系及其建立方法,本发明采用HBV真核表达质粒pREP-HBV-YVDD,其载体骨架为pREP10载体,HBV复制子为含cp启动子以及完整HBV前基因组的HBV1.2倍体,并定点诱变为恩替卡韦耐药基因型S202G后插入切除RSV启动子的pREP10构建成HBV真核表达质粒pREP-HBV-S202G;将该质粒转染HepG2细胞后通过潮霉素筛选后检测细胞中HBV复制、特异性抗原的表达及病毒颗粒的产生,并与HepG2.2.15细胞株比较后,获得耐药HBV细胞株HepG2.HS202G,保藏号为CGMCC?No.6393。该细胞系可用于筛选抗药物、研究HBV生物学特点及其与细胞间相互作用的HBV细胞模型。

    二甲双胍在制备降低乙型肝炎病毒表面抗原水平药物中的用途

    公开(公告)号:CN103446080A

    公开(公告)日:2013-12-18

    申请号:CN201210172319.3

    申请日:2012-05-29

    Abstract: 本发明属医药领域,涉及口服降糖药二甲双胍新的药用用途。具体涉及二甲双胍在制备降低乙型肝炎病毒表面抗原水平药物中的用途。本发明通过体外细胞培养、药物干预试验,结果显示,所述的二甲双胍能明显降低稳定细胞系HepG 2.2.15细胞培养上清HBsAg滴度,以及降低细胞培养上清HBeAg滴度,对HepG 2.2.15细胞培养上清HBV-DNA和对细胞胞内HBV复制中间体有抑制趋势。本发明的二甲双胍可制备抑制HBsAg的药物,更进一步的,可制备降低或消除乙型肝炎病毒慢性感染患者血清表面抗原的药物;以及降低或抑制乙型肝炎病毒核心抗原的药物;以及制备抑制乙型肝炎病毒DNA及病毒复制中间体的制剂。

    一种测定乙型肝炎病毒阿德福韦耐药变异的方法

    公开(公告)号:CN101004415A

    公开(公告)日:2007-07-25

    申请号:CN200710036511.9

    申请日:2007-01-16

    Abstract: 本发明属医学检验领域,涉及药物耐药基因的检测方法,具体涉及一种测定乙型肝炎病毒阿德福韦耐药变异的方法。本发明方法克服现有技术的缺陷,通过设计特定引物,采用套式PCR方法进行扩增,所获扩增产物使用BglI、BseDI进行酶切反应电泳后,进行限制性片断长度多态性分析。经检测20余例长期使用阿德福韦抗病毒治疗的患者,和已知发生ADV耐药的质粒,与现有技术进行比较,显示结果完全相符。本发明方法可以一次同时检测181位和236位核苷酸变异情况,具有灵敏、特异、简便的特点,适用于阿德福韦酯耐药变异的临床监测工作。

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