一种马立克氏病毒的悬浮培养方法

    公开(公告)号:CN107058243A

    公开(公告)日:2017-08-18

    申请号:CN201710179331.X

    申请日:2017-03-23

    CPC classification number: C12N7/00 C12N2710/16351

    Abstract: 本发明公开了一种马立克氏病毒的悬浮培养方法,包括步骤:1)鸡胚源DF‑1细胞系的传代与培养;2)细胞毒种的繁殖:用稀释液将马立克氏病毒种稀释,将病毒和DF‑1细胞一起接入含细胞培养液的培养瓶中培养,收获病毒作为毒种;3)制苗用病毒的吸附培养:将毒种稀释为病毒液,和新的鸡胚源DF‑1细胞一起接入含有微载体和悬浮培养液的培养瓶中,进行悬浮吸附培养;4)病毒的增殖培养及收获:弃去悬浮培养液,加入病毒增殖培养液进行悬浮增殖培养;当接入的细胞病变率达80%以上时,收获病毒液并保存;该方法用微载体结合悬浮的方式对马立克氏病毒进行培养,克服了传统疫苗生产受制于鸡胚的供应的缺点,避免了感染外源病毒的风险。

    一种禽流感病毒纯化的方法

    公开(公告)号:CN105505889A

    公开(公告)日:2016-04-20

    申请号:CN201510995944.1

    申请日:2015-12-24

    CPC classification number: C12N7/00 C12N2760/16151

    Abstract: 本发明公开了一种禽流感病毒纯化的方法,具体包括如下步骤:两次过滤:采用不锈钢筛网对收获的含禽流感病毒抗原的半成品胚液进行两次过滤;离心:滤出液进行离心,收集上清液和沉淀;溶解:沉淀中加入PBS溶液重新溶解,并且搅拌,得到溶液;离心:溶液进行离心,收集上清液;浓缩:采用孔径为30-500K的膜包对上清液进行浓缩;分子筛层析:以葡聚糖凝胶G200为层析填料,采用纯净水平衡层析柱,以0.05M的PBS溶液为洗脱液,对浓缩液进行分子筛层析,回收禽流感病毒液;浓缩:采用膜包对回收禽流感病毒液使用进行浓缩,获得纯化后的禽流感病毒。该方法处理量大,处理速度快,能够去除胚液中80%以上的异源蛋白,病毒回收率大于85%,并且不影响病毒HA效价。

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