公开(公告)号：CN105463003A

公开(公告)日：2016-04-06

申请号：CN201510920436.7

申请日：2015-12-11

Applicant: 扬州大学

Inventor： 李国才 ,  徐桐桐 ,  卞晓锐 ,  单彩龙 ,  赵丹 ,  焦红梅

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/66

CPC classification number: C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  C12N2800/101 ,  C12N2810/10

Abstract: 本发明提供了一种消除卡那霉素耐药基因活性的重组载体,以消除生物体内耐药细菌，解决细菌具有卡那霉素耐药性的问题。所述消除卡那霉素耐药基因活性的重组载体的特征在于，包括消除了氯霉素抗性的pCas9载体和针对卡那霉素抗性基因kan的gRNA核酸序列：KR58或KR208，其具体核酸序列分别如下：KR58：GCCGCGAT TAAATTCCAACA或KR208：CAATGATG TTACAGATGAGA。其构建方法主要包括：利用基因编辑新工具CRISPR/Cas9系统携带该间区核酸，去除重组载体上的氯霉素抗性基因后转化入减毒沙门菌等疫苗载体菌，重组菌与卡那霉素耐药菌共培养，重组菌细胞内的重组载体通过接合方式进入卡那霉素耐药菌，有效抑制卡那霉素抗性基因kan的活性，使原来耐药的细菌在卡那霉素培养基上不能生长。