公开(公告)号：CN103525779A

公开(公告)日：2014-01-22

申请号：CN201310451398.6

申请日：2013-09-27

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 徐家萍 ,  高娟 ,  王文兵 ,  鲍先巡 ,  刘明辉

IPC: C12N9/12

CPC classification number: C12N9/1205 ,  C12N15/866 ,  C12Y207/01074

Abstract: 本发明公开了一种利用双启动子表达载体在家蚕幼虫中表达纯化抗肿瘤药物脱氧胞苷激酶DCK的方法。步骤包括：将通过修饰加有His标签的dck基因及polh基因分别克隆到启动子表达载体以构建重组双启动子表达载体；将重组双启动子表达载体转化到DH10Bac感受态细胞中，提取质粒，获得重组穿梭载体Bacmid；Bacmid在转染试剂脂质体介导下转染家蚕培养细胞，获得重组病毒多角体；重组病毒多角体定量后以经口接种五龄家蚕幼虫的方式，在家蚕幼虫中表达，并通过Ni-NTA亲和层析纯化，获得具有一定酶活性的脱氧胞苷激酶。本发明的有益效果在于经口添食家蚕，使脱氧胞苷激酶dck基因在家蚕体中表达纯化，与人工注射家蚕相比，省时省力提高了生产效率，为家蚕生物反应器产业化提供了技术支撑，并为抗肿瘤药物DCK的研究提供了物质基础，拓宽了杆状病毒表达系统生产人类急需的蛋白药物、基因工程疫苗等领域的应用前景。

公开(公告)号：CN101558754A

公开(公告)日：2009-10-21

申请号：CN200910116917.7

申请日：2009-05-31

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 徐家萍 ,  刘朝良 ,  鲍先巡 ,  魏国清 ,  刘明辉 ,  林青松 ,  朱保健 ,  张和禹 ,  张军

IPC: A01K67/04

Abstract: 本发明公开了一种利用泰国家蚕抗病基因选育抗病毒病家蚕品种的方法，是选用春秋兼用我国现行家蚕品种871、872做母本，用引进的泰国热带抗病品种NL做父本；分别杂交，导入抗病基因；杂交第2代和第3代蚕采用分别混合育饲养，杂交各代从第2龄开始，采用“群体添食”NPV核型多角体病毒，添毒浓度“逐龄梯度增加”的方法进行筛选；以家蚕品种871、872作轮回亲本，分别采用已留种抗病毒蚕个体与之回交，以“回交导入”和“世代定向添毒筛选选育”相结合的方法，通过多次回交和添毒筛选，获得遗传性状比较稳定的NL纯和系统，在选育过程中系统的各项经济性状和生产性能得到巩固提高，育成目标纯种871NL和872NL。所得到的抗病毒家蚕品种经济性状好、强健好养。