公开(公告)号：CN103114097A

公开(公告)日：2013-05-22

申请号：CN201210525391.X

申请日：2012-12-07

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 林毅 ,  王艳玲 ,  蔡永萍 ,  姜家生 ,  郭宁

IPC: C12N15/29 ,  C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种β微管蛋白-8基因片段的构建获得方法，步骤包括：对棉花雄性花药的总DNA的提取，设计引物对靶序列进行PCR扩增，目的片段的回收；上述引物与靶序列间的Tm值在63.6~65.4℃，上述引物无发夹结构，上述引物内部链无二级结构。本发明的优点在于，提出了棉花核雄性不育系花药中高质量的总DNA提取方法以及β微管蛋白-8基因片段引物的设计，首次在棉花核雄性不育系中克隆了β微管蛋白-8基因片段，首次通过比较一个不育相关基因的片段在不育株与可育株中的DNA序列差异，从而进一步探讨其与不育性状的关系。

公开(公告)号：CN103352044A

公开(公告)日：2013-10-16

申请号：CN201310282227.5

申请日：2013-07-05

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 林毅 ,  刘鑫 ,  王艳玲 ,  姜家生 ,  蔡永萍

IPC: C12N15/53 ,  C12N15/10

Abstract: 本发明公开了一种Spot-9-UDP-葡萄糖脱氢酶基因片段的构建获得方法，步骤包括：提取棉花雄性不育系与可育系的花药总DNA，设计并合成如SEQ ID NO:1所示的上游引物和如SEQ ID NO:2所示的下游引物，以花药总DNA为模板进行PCR扩增，分离出编码棉花Spot-9-UDP-葡萄糖脱氢酶的基因。本发明的突出优势是设计并合成了Spot-9-UDP-葡萄糖脱氢酶基因片段特异性引物，同时提供了该基因PCR扩增的最佳反应条件，首次在棉花雄性不育系中克隆了该基因片段；通过比较该基因在不育系与可育系植株中表达的差异性，为进一步探讨该基因与棉花不育性状之间的关系奠定了基础。

公开(公告)号：CN102605073A

公开(公告)日：2012-07-25

申请号：CN201210077530.7

申请日：2012-03-22

Applicant: 安徽农业大学

Inventor： 郭宁 ,  王旺华 ,  林毅 ,  樊洪泓 ,  高俊山 ,  姜家生

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明公开了一种利用cDNA-SRAP技术分析棕色棉子叶衰老基因差异表达的方法，其步骤为，首先将待分析的材料用浓度为450-550ppm的乙烯喷洒处理18-24小时后提取子叶中的总RNA；再通过cDNA-SRAP PCR反应，对反应产物获得的特异性条带的进行回收、纯化以及序列的功能分析。本发明利用cDNA-SRAP技术在分子水平上分析相关基因的差异表达，以期探明棕色棉子叶衰老的分子机制，加深对棕色棉叶片衰老的认识，为人为的调控彩色棉叶片衰老进程提供理论依据。