公开(公告)号：CN117304329A

公开(公告)日：2023-12-29

申请号：CN202311154447.X

申请日：2023-09-07

Applicant: 华南农业大学

Inventor： 王弘 ,  方如玉 ,  沈兴 ,  沈玉栋 ,  杨金易 ,  徐振林 ,  孙远明

IPC: C07K16/44 ,  C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  G01N33/53

Abstract: 本发明公开了一种提高19‑去甲睾酮纳米抗体表达量及灵敏度的方法，包括以下步骤：将19‑去甲睾酮纳米抗体融合硫氧还蛋白A(TrxA)构建表达载体，并转化至大肠杆菌表达宿主中进行诱导表达，得到菌体中的不溶组分即为纳米抗体包涵体表达组分，并将其包涵体表达组分通过一步法进行变性、复性、纯化和脱盐处理后即可提高其纳米抗体的表达量及灵敏度。本发明不仅能显著提高19‑去甲睾酮纳米抗体的表达量，提高6倍；同时采用一步法进行包涵体柱上复性、纯化及脱盐能明显提高纳米抗体的灵敏度，提高了35.04倍；并通过建立ic‑ELISA方法检测19‑去甲睾酮，其检测限低至0.877pg/mL，灵敏度43.67pg/mL。