公开(公告)号：CN102796714A

公开(公告)日：2012-11-28

申请号：CN201210015196.2

申请日：2012-01-18

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 冯雁 ,  张宇 ,  安娇 ,  杨广宇

IPC: C12N9/16 ,  C12N15/55 ,  C12N1/21 ,  A62D3/02 ,  C12R1/19 ,  A62D101/04 ,  A62D101/28

Abstract: 本发明提供了一种磷酸三酯酶突变体及其制备方法和应用。本发明由来源于嗜热细菌的Geobacillus kaustophilus HTA426的磷酸三酯酶基因出发，利用易错PCR的方法，经过多轮的突变和筛选，最终获得一个磷酸三酯酶活力显著提高的突变体，在该突变体的氨基酸序列中涉及到的突变为：Phe28Ile、Tyr99Leu、Thr171Ser、Phe228Leu、Asn269Ser、Val270Gly、Trp271Cys、Gly273Asp。突变体对于几种常见的有机磷杀虫剂的比活力相比野生型得到了显著提高，在有机磷毒物的生物降解领域具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN102796714B

公开(公告)日：2014-06-25

申请号：CN201210015196.2

申请日：2012-01-18

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 冯雁 ,  张宇 ,  安娇 ,  杨广宇

IPC: C12N9/16 ,  C12N15/55 ,  C12N1/21 ,  A62D3/02 ,  C12R1/19 ,  A62D101/04 ,  A62D101/28

Abstract: 本发明提供了一种磷酸三酯酶突变体及其制备方法和应用。本发明由来源于嗜热细菌的Geobacillus？kaustophilus？HTA426的磷酸三酯酶基因出发，利用易错PCR的方法，经过多轮的突变和筛选，最终获得一个磷酸三酯酶活力显著提高的突变体，在该突变体的氨基酸序列中涉及到的突变为：Phe28Ile、Tyr99Leu、Thr171Ser、Phe228Leu、Asn269Ser、Val270Gly、Trp271Cys、Gly273Asp。突变体对于几种常见的有机磷杀虫剂的比活力相比野生型得到了显著提高，在有机磷毒物的生物降解领域具有广阔的应用前景。

公开(公告)号：CN102559567A

公开(公告)日：2012-07-11

申请号：CN201110406838.7

申请日：2011-12-08

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 冯雁 ,  田东升 ,  杨广宇 ,  安娇 ,  谢渊 ,  白挨玺

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N9/42 ,  D21C9/00 ,  C12P19/14 ,  A23K1/165 ,  D01C1/00 ,  C12G3/02 ,  C12R1/01 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了一种嗜热内切木聚糖酶基因工程菌的构建及其酶的应用。嗜热内切木聚糖酶基因来源于热解纤维素菌(Caldicellulosiruptor bescii DSM 6725)；本发明采用生物工程技术，通过细菌的培养、目的基因钓取、构建表达载体、及将载体转化到宿主细胞中等步骤构建成嗜热内切木聚糖酶基因工程菌，再经细胞培养、收集沉淀、超声破碎、热处理、亲和层析等步骤纯化获得嗜热内切木聚糖酶。本发明的嗜热内切木聚糖酶具有很好的热稳定性，及对金属离子、有机溶剂及表面活性剂的抗性，可用于造纸、食品、饲料、纺织、酿酒和医药的生产中。

公开(公告)号：CN104293748A

公开(公告)日：2015-01-21

申请号：CN201410535145.1

申请日：2014-10-11

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 冯雁 ,  杨广宇 ,  吴秀娟 ,  安娇 ,  于瑶 ,  王慧楠 ,  张少博

IPC: C12N9/42 ,  C12N15/56 ,  C12N15/70

CPC classification number: C12N9/2482 ,  C12Y302/01008

Abstract: 本发明公开了一种高热稳定性的内切木聚糖酶。本发明通过对来源于嗜热微生物的木聚糖酶DtX进行改造，去除了信号肽，实现了木聚糖酶基因在异源宿主细胞如大肠杆菌内的高效表达。本发明进一步对该木聚糖酶进行改造，截去了C端的碳水化合物结合结构域，并在C末端引入二硫键，构建的木聚糖酶蛋白突变体的分子量更小，热稳定性提高，比活力也大大提高。通过以上方式，使该木聚糖酶及其突变体更有潜力应用于工业生产。

公开(公告)号：CN104313000B

公开(公告)日：2018-10-19

申请号：CN201410534600.6

申请日：2014-10-11

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 杨广宇 ,  冯雁 ,  安娇 ,  于瑶 ,  王慧楠 ,  张少博

IPC: C12N9/42 ,  C12N15/56

Abstract: 本发明公开了一种基因工程木聚糖酶，其是木聚糖酶CbX的N末端截去了信号肽后的突变体，同时实现了木聚糖酶基因在异源宿主细胞内的高效表达。本发明进一步对该木聚糖酶进行改造，截去了C端的碳水化合物结合结构域，并在C末端引入二硫键，构建的木聚糖酶蛋白突变体的分子量更小，热稳定性提高，比活力也大大提高。通过以上方式，使该木聚糖酶及其突变体更有潜力应用于工业生产。

公开(公告)号：CN104313000A

公开(公告)日：2015-01-28

申请号：CN201410534600.6

申请日：2014-10-11

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 杨广宇 ,  冯雁 ,  安娇 ,  于瑶 ,  王慧楠 ,  张少博

IPC: C12N9/42 ,  C12N15/56

CPC classification number: C12N9/2482 ,  C12Y302/01008

Abstract: 本发明公开了一种基因工程木聚糖酶，其是木聚糖酶CbX的N末端截去了信号肽后的突变体，同时实现了木聚糖酶基因在异源宿主细胞内的高效表达。本发明进一步对该木聚糖酶进行改造，截去了C端的碳水化合物结合结构域，并在C末端引入二硫键，构建的木聚糖酶蛋白突变体的分子量更小，热稳定性提高，比活力也大大提高。通过以上方式，使该木聚糖酶及其突变体更有潜力应用于工业生产。

公开(公告)号：CN102816728A

公开(公告)日：2012-12-12

申请号：CN201210174569.0

申请日：2012-05-30

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 冯雁 ,  谢云龙 ,  田东升 ,  安娇 ,  杨广宇

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  C12N9/42 ,  C12R1/19 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明提供了一种β-1，4-内切木聚糖酶工程菌的构建及其酶的应用。β-1，4-内切木聚糖酶基因来源于热解纤维素菌(Caldicellulosiruptor bescii DSM 6725)，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，命名为木聚糖酶基因Cb Xyn10C。本发明采用生物工程技术，通过细菌的培养、目的基因提取、构建表达载体、及将载体转化到宿主细胞中等步骤构建成β-1，4-内切木聚糖酶工程菌。再将含有目的基因的大肠杆菌工程菌进行放大培养，然后通过超声破碎、对杂蛋白热失活，并通过进一步的分离纯化，获得嗜热木聚糖酶。本发明中的嗜热木聚糖酶具有很好的热稳定性，可用于造纸、食品、饲料、纺织和能源的生产领域中。