本发明涉及在Fusarium venenatum宿主菌株中制备哺乳动物胰蛋白酶的方法，包括(a)在适宜表达所述哺乳动物胰蛋白酶并将其分泌到培养基中的条件下在培养基中培养所述Fusarium venenatum宿主菌株，其中所述Fusarium venenatum宿主菌株包含含有核酸序列的核酸构建体，所述核酸序列编码哺乳动物胰蛋白酶的成熟编码序列并与编码Fusarium oxysporum胰蛋白酶原的信号肽和原肽的SEQ ID NO：1的核苷酸58－129可操作连接；和(b)从所述培养基中回收所述哺乳动物胰蛋白酶。本发明还涉及包含核酸序列的构建体，所述核酸序列编码哺乳动物胰蛋白酶的成熟编码序列、并与编码Fusarium oxysporum胰蛋白酶原的信号肽和原肽的SEQ ID NO：1的核苷酸58－129可操作地连接，以及涉及包含所述构建体的载体和Fusarium venenatum宿主菌株。