本发明公开了一种金属‑G4DNAzyme核酸框架介导的酶固定化方法与应用。将酶和含有G四链体的核酸序列在PBS缓冲溶液中共孵育，加入二价金属离子，置于离心管中震荡后超声，离心上清后去离子水洗涤，采用PBS缓冲溶液复溶沉淀后，与高氯血红素共孵育，离心去上清，洗去多余的高氯血红素，得到金属‑G4DNAzyme核酸框架介导的酶。本发明克服现有功能性蛋白质与核酸偶联方法过程复杂、条件苛刻，难以保留蛋白质的活性及功能的问题。本发明通过仿生矿化实现酶与核酸的偶联，所形成的功能性金属核酸框架固定化酶，兼具靶标识别与信号放的双重功能，并将其应用于小分子靶标的检测。