本发明提供了一种脱细胞羊膜基质水凝胶及其制备方法，所述制备方法包括以下步骤：羊膜组织预处理、清洗、脱细胞、研磨、冻干、消化和酸碱中和过程。本发明提供的脱细胞羊膜基质水凝胶在保留羊膜细胞基质中的胶原蛋白、纤维连接蛋白、糖蛋白等成分的同时，去除活性细胞，从源头降低了其免疫原性。本发明提供的脱细胞羊膜基质水凝胶可以模拟体内细胞所处的微环境，提供细胞黏附和生长所需的支持和信号，可用来构建组织工程支架，为细胞的定向生长和组织再生提供支持。此外，所述脱细胞羊膜基质水凝胶还可以作为药物载体，用于体内药物释放和治疗，在医学研究和临床应用中具有很高的应用潜力。