本发明属于生物技术领域，涉及一种减毒的猪流行性腹泻病毒重组毒株及其构建与应用。本发明将PEDV CH/SX/2016毒株的S基因替换为HNXP S基因后，拯救获得了重组毒株rCH/SX/2016‑SHNXP；但是该毒株rCH/SX/2016‑SHNXP为高致病性毒株，在此基础上，本发明又缺失了rCH/SX/2016‑SHNXP中E蛋白的第23‑29位氨基酸，拯救获得了重组毒株rPEDV‑EΔaa23‑aa29；与rCH/SX/2016‑SHNXP相比，重组毒株rPEDV‑EΔaa23‑aa29能够诱导更高的免疫应答，且毒力显著减弱，可用于制备PEDV诊断试剂和/或疫苗。