本发明公开了一种将聚唾液酸合成大肠杆菌经基因改造为产唾液酸乳糖的方法，属于生物工程技术领域。方法包括：敲除大肠杆菌中的Neu5Ac α‑2,8‑唾液酸转移酶(NeuS)基因，导入唾液酸转移酶基因。通过设计引物扩增NeuS基因的sgRNA序列，得到pTargetF‑sgRNA质粒；利用融合PCR制备重组同源臂片段，转化大肠杆菌并制作感受态细胞，进行电转化获得阳性敲除子。通过添加IPTG和高温培养，消除pTargetF‑sgRNA质粒和pCAS质粒，得到纯净的基因编辑菌株。本方法提高了基因编辑效率和稳定性，实现了高效生产唾液酸乳糖，为其工业化生产提供了新途径。