一种葡萄糖氧化酶生产方法，包括如下步骤：步骤一：对酿酒酵母进行诱变操作；步骤二：对诱变后的酿酒酵母分别进行挑取菌种加入菌种培养液中进行培养；步骤三：选择葡萄糖氧化酶含量最高的三个培养液进行放大培养；步骤四：选择葡萄糖氧化酶含量最高的放大培养的培养液转入发酵罐中进行发酵培养；步骤五：步骤四发酵培养完成过滤去固态杂质，得到发酵液，采用阴离子交换树脂进行洗脱后浓缩脱盐得到葡萄糖氧化酶溶液；步骤六：步骤五得到的葡萄糖氧化酶溶液进行冻干后粉碎分装即得成品。本发明通过诱变选择葡萄糖氧化酶产出量较高的变异，酿酒酵母，然后通过持续使用精准配置的培养液进行培养最终得到纯度符合检测标准的葡萄糖氧化酶。