本发明涉及一种鸭瘟病毒的亚单位gD蛋白及其制备方法和应用，所述亚单位gD蛋白为鸭瘟病毒gD蛋白截短的胞外区蛋白，亚单位gD蛋白的氨基酸序列为：①如序列SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；②由序列SEQ ID NO.1经过取代、缺失或添加若干氨基酸得到的具有免疫原性的衍生氨基酸序列，且所述衍生氨基酸序列与序列SEQ ID NO.1具有80％‑100％的序列同一性。亚单位gD蛋白主要通过构建重组质粒、重组质粒转染细胞株、筛选高表达的细胞株、纯化鸭瘟病毒的亚单位gD蛋白制备而成，能较好的适用于鸭瘟病毒的亚单位疫苗或诊断试剂中，具有分泌表达高效、蛋白纯度高、易于纯化、生产成本降低、安全性能高等特点。