本发明涉及一种猪血凝性脑脊髓炎重组DNA疫苗及其构建方法与应用，属于疫苗技术领域。本发明的猪血凝性脑脊髓炎重组DNA疫苗，为猪血凝性脑脊髓炎NTD的重组DNA疫苗或猪血凝性脑脊髓炎RBD的重组DNA疫苗；所述猪血凝性脑脊髓炎NTD的重组DNA疫苗的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述猪血凝性脑脊髓炎RBD的重组DNA疫苗的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。该重组DNA疫苗免疫小鼠后，诱导高水平的Th1型和Th2型细胞因子分泌，对小鼠起到良好的保护作用且无不良反应，说明本发明的重组DNA疫苗在预防猪血凝性脑脊髓炎具有良好的效果。