本发明提供了一种合方鲫白介素26重组蛋白及其制备方法和应用，该方法利用分子生物学方法通过大肠杆菌表达大量制备具有高效的抗菌功能的鱼类白介素26重组蛋白，并应用于鱼类亚单位疫苗或者鱼类饲料添加剂，既能提高鱼类存活率和产量，又能减少抗生素等化学试剂对环境的污染，可以显著降低生产成本，提高经济效益，具有广阔的市场潜力。相较于CN111471687A，本发明选择载体pET28a，经该载体表达后，白介素26蛋白的标签蛋白很小(标签蛋白约3kDa)，表达的重组蛋白最接近自然结构状态，生物活性更强，重组蛋白的抗菌功能活性更高，0.1ug/g鱼重的剂量即可明显提高鱼类抗细菌感染能力。