本发明公开了一种制曲过程中米曲霉孢子数检测方法。该方法包括如下步骤：将乙醇溶液、稀硫酸溶液和水加入到米曲霉中，超声分散均匀后利用500目滤布过滤去除杂质，然后加水稀释成多个浓度梯度的孢子溶液，并加入糖类物质调节溶液比重为1.03～1.18，再利用血球计数板法分别测定其孢子浓度，利用散射透射比式浊度计测定孢子悬浮液的浊度，最后建立孢子悬浮液的浊度和浓度的线性方程，可以根据该线性方程测定米曲霉的孢子浓度或数量。本发明方法操作简单，可以减少人为误差，可实现连续、批量种曲样品的孢子数检测，检测效率高。