本发明属于生物技术领域，涉及一种无色透明罗非鱼的生产方法。首先，通过CRISPR/Cas9基因编辑技术对罗非鱼pnp4a进行突变，发现纯合突变鱼在胚胎发育早期虹彩细胞完全缺失。本发明利用CRISPR/Cas9基因编辑技术将罗非鱼tyrb、csf1ra、pnp4a三个基因同时突变以消除黑色素细胞、黄色素细胞、虹彩细胞和红色素细胞，获得了一种遗传背景清楚并可用于基础医学和生物学研究的无色透明罗非鱼。经鉴定，该品系后代可育，可用于规模化生产。