本发明公开了一种抗虫蛋白Cry 1Ah杂交瘤细胞株及其产生的抗体和应用，所述杂交瘤细胞株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.45482。其制备方法包括：a)纯化原核表达的Cry 1Ah重组蛋白；b)将Cry 1Ah重组蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠；c)收集免疫BALB/c小鼠的脾细胞并与SP2/0细胞进行融合；d)通过有限稀释法进行亚克隆，亚克隆5‑7天进行ELISA检测，直至筛选出稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株进行扩大再培养和保存。本发明的杂交瘤细胞株分泌的单抗为实现转基因作物中抗虫蛋白Cry 1Ah的检测奠定了基础。