本发明提供了一种黄曲霉检测引物组、试剂盒及其应用，属于真菌检测技术领域，本发明提供的黄曲霉检测引物组包括如SEQ ID NO.1~6所示的引物，克服了现有技术中黄曲霉检测不准确的问题。本发明提供的黄曲霉检测引物组灵敏度高、特异性强，检测限低至1000 copies/mL，有助于黄曲霉感染的早筛早诊，便于及时进行干预治疗和控制病情。本发明提供的检测黄曲霉的试剂盒采用恒温扩增‑核酸胶体金层析法，可在35min内完成检测反应，结果判断简便；使用本发明提供的试剂盒单次检测成本低费用低，对仪器设备要求低，适用于基层医疗单位，能够进行居家自测试，有助于真菌感染的早诊。