本发明公开了抗猪Gasdermin D蛋白单克隆抗体及其应用。本发明提供五株小鼠抗猪GSDMD蛋白的单抗，并建立了利用所述单抗对猪GSDMD蛋白进行免疫印迹和免疫荧光检测的方法。结果表明，五株单抗均能够特异性识别猪GSDMD全长蛋白(GSDMD‑FL)，其中15H6、19H3、23H10、27A10能进一步识别猪GSDMD蛋白被活化切割后所形成的具有膜成孔活性的GSDMD氨基端片段(GSDMD‑NT)，25E2识别猪GSDMD蛋白的羧基端片段(GSDMD‑CT)。本发明提供的单抗为开展猪GSDMD蛋白生物学功能研究、猪体内外细胞焦亡研究提供了必需试剂，具有广阔的商品化生产前景和良好的市场需求。