本发明公开了一种齐氏罗非鱼性染色体特异分子标记、检测引物、试剂盒及其用途，属于分子标记技术领域。该齐氏罗非鱼性染色体特异分子标记包括X染色体和Y染色体特异分子标记；X染色体特异分子标记核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，Y染色体特异分子标记核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明首次筛选到齐氏罗非鱼X和Y染色体特异分子标记，建立了齐氏罗非鱼遗传性别PCR鉴定方法，并将本方法应用到全雄齐氏罗非鱼培育过程中的遗传性别鉴定。整个过程具有高效，准确和稳定的特点，在齐氏罗非鱼性别控制和全雄齐氏罗非鱼苗种的持续规模化生产中具有重要的应用价值。