一种检测替加环素耐药基因和/或其变体的引物组合，所述替加环素耐药基因包含tetX(1)、tetX(2)、tetX(3)、tetX(4)、tetX(5)中的至少一种。本发明提利用五重荧光PCR技术，可快捷地甄别样品中是否有tet(X)耐药基因，及tet(X)耐药基因变体的种类。通过大量序列分析、比对获得了用于检测替加环素耐药基因tet(X)的5种变体(tet(X1)、tet(X2)、tet(X3)、tet(X4)、tet(X5))的若干引物和探针。将各个引物探针组合进行预实验，比较灵敏度、特异性等性能，最终得到用于检测替加环素耐药基因tet(X)的5种变体的引物探针组。