本发明属于细胞重组与蛋白表达技术领域，具体涉及一种表达狂犬病病毒蛋白的构建方法和应用，所述一种表达狂犬病病毒蛋白为狂犬病病毒的重组G蛋白，所述重组G蛋白的基因序列为SEQ ID NO.1所示。本发明还成功建立了表达编码改造G蛋白的CHO悬浮细胞系，所述细胞系为CHO‑TEGH悬浮细胞系，其保藏信息如下，命名：中国仓鼠卵巢细胞CHO‑GH8；保藏单位：中国典型培养物保藏中心；保藏日期：2023年4月23日；保藏地址：武汉武汉大学保藏中心；保藏编号：CCTCCNO：C202389；该细胞系可稳定、高效表达具有优秀免疫原性的RABVG蛋白，具有应用于狂犬病新型亚单位疫苗、抗体诊断试剂的潜力。