本发明公开了一种快速原位活体检测烟叶中尼古丁的方法，包括以下步骤：(1)配制成一系列浓度梯度的NIC与定量PA的混合溶液；(2)将丝网印刷电极进行活化处理；(3)测其SWV的响应，将ΔINIC/ΔIPA与NIC浓度关联起来，绘制出标准曲线；4)SWV检测烟叶活体样品中的ΔINIC/ΔIPA，再根据标准曲线计算得到新鲜活体烟叶中NIC的含量。本发明的双信号比率型电化学测试方法具有操作简单、容易操控、反应条件温和成本低廉、灵敏度高和响应速度快等优点，对于精准检测活体烟叶中NIC含量具有十分重要的意义。