本发明提供一种抗生素定量检测装置及使用方法，涉及抗生素检测技术领域。该抗生素定量检测装置，所述底座的上侧面固定连接有两个立柱，两个所述立柱的外侧面均滑动连接有滑动架，两个所述立柱的后侧面均设置有滑槽，两个所述滑槽的内侧滑动连接有导杆，两个所述导杆的上端固定连接有一个连接板；两个所述滑动架之间固定连接有安装架，所述安装架上设置有安装口，所述安装口内插入有定量筒，所述连接板的下侧面固定连接有推动杆。通过调整V形管至水平状态，可以使定量筒内的抗生素检测样品量保持一致，在将斜顶块向下推动后，推动开口环转动这样通孔和V形管的连通阻断，锥形塞和上塞下推期间将定量筒内的抗生素检测样品从定量筒下端推出。