本发明涉及生物技术领域，公开了一种DNA分子及其制备方法与应用、重组病毒及其制备方法与应用。所述DNA分子含有串联连接的5’非编码区序列、插入有Nano荧光素酶的编码序列的衣壳蛋白C的编码序列、膜和膜蛋白前体prM的编码序列、包膜蛋白E的编码序列、非结构蛋白的编码序列和3’非编码区序列，其中，5’非编码区序列、衣壳蛋白C的编码序列、膜和膜蛋白前体prM的编码序列、包膜蛋白E的编码序列、非结构蛋白的编码序列和3’非编码区序列来源于黄热病毒。所述重组病毒的基因组RNA对应的cDNA序列与所述的DNA分子的序列相同。所述的DNA分子和所述重组病毒可用于筛选黄热病毒治疗药物。