本发明公开了医疗器械浸提液中挥发性及半挥发性未知物含量检测方法，包括以下步骤：首先，配制系列标准工作液和替代标准品混合溶液，使用气相色谱质谱联用仪进行分析，根据分析结果建立标准工作液校准曲线，计算替代标准品相对于邻苯二甲酸二甲酯的相对响应因子；其次，对医疗器械进行浸提，获取浸提液，使用气相色谱质谱联用仪检测浸提液，将浸提液检测结果分别与系列标准工作液和替代标准品混合溶液检测结果进行对比鉴定，并计算得出浸提液中的未知物浓度；最后，根据未知物浓度计算得出未知物含量。本发明提供的检测方法降低了只关注挥发性及半挥发性已知物定量带来的安全风险，也降低了对多种挥发性及半挥发性已知物进行开发验证的成本。