本发明公开一株IBV病毒QX亚型毒株，并公开可复制IBV病毒QX亚型毒株的基因敲除细胞系及其构建方法和应用，挑选多株传代细胞系进行IBV病毒的感染，检测IBV病毒的复制载量和滴度，初步筛选能复制IBV病毒的细胞系；对所筛选出的细胞系利用siRNA干扰方法和/或基因敲除方法，干扰和/或敲除抑制病毒复制的相关基因，筛选得到使病毒大量复制的稳定传代细胞系。本发明构建一株敲除miRNA生成过程中相关酶的稳定传代细胞系可以极显著提高传染性支气管炎病毒QX亚型的复制量。该基因敲除的细胞系有望开发成为替代传统鸡胚繁毒的工具细胞系，应用细胞系繁殖的家禽病毒纯度高，杂质少，纯化简便且可以显著降低病毒的繁殖成本。