一种耐热木聚糖酶突变体及其应用，涉及基因工程和遗传工程技术领域。本发明以来源于真菌Cladophialophora carrionii的第10家族木聚糖酶CcXyl10B为母本，采用理性设计方法，筛选到突变体V126F、S210P和P243L三个突变体的热稳定性明显提升，且催化活力无明显降低。本发明发现了影响第10家族木聚糖酶热稳定性的三个关键氨基酸残基，对第10家族木聚糖酶热稳定性改良具有重要指导意义，同时本发明为木聚糖酶的产业化生产及其在饲料中的应用提供借鉴。