本发明提供一种耐冷冻酿酒酵母菌株及其应用。本发明提供的耐冷冻酿酒酵母菌株为：酿酒酵母i5菌株(Saccharomyces cerevisiae i5)，所述酿酒酵母i5菌株(Saccharomyces cerevisiae i5)于2020年11月9日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M 2020708；或者，酿酒酵母i9菌株(Saccharomyces cerevisiae i9)，所述酿酒酵母i9菌株(Saccharomyces cerevisiae i9)于2020年8月26日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO：M 2020447。本发明提供的耐冷冻酿酒酵母菌株具有较强的抗冷冻性，能有效的应用于不同冷冻面团产品。