本发明提供了一种基于H2O2的无酶丙酮酸传感检测方法，包括：采用三电极系统，所述三电极系统的电解质溶液中含有H2O2；向所述电解质溶液中加入不同浓度的丙酮酸钠，利用计时电流法获取电流响应与丙酮酸钠浓度的标准曲线；所述三电极系统的工作电极为H2O2敏感电极；根据含有H2O2和丙酮酸的待测样品溶液产生的电流响应的值，对比所述标准曲线，获得丙酮酸钠的浓度。该方法基于丙酮酸‑H2O2的去碳酸基反应，利用普鲁士蓝修饰电极在线实时监测H2O2消耗速率，从而定量获得丙酮酸浓度。采用本方法的丙酮酸浓度检测策略具有较宽的线性检测范围，可有效避免因丙酮酸氧化酶稳定性差导致的重复效果差等问题，可在复杂的生物体系中实现快速、高效的实时检测，检测限可达0.5mM。