本发明公开了一种阿魏菇Pleurotus ferulae lenzi中抗肿瘤蛋白提取物及其制备方法与应用，本发明的抗肿瘤蛋白提取物是将阿魏菇Pleurotus ferulae lenzi子实体烘干并研磨成粉后，经浸提、盐析、透析、冻干、离子交换而获得。该蛋白提取物命名为XD1，是分子量约为17.5kDa的单体蛋白；对人非小细胞肺腺癌细胞株A549的生长具有明显的抑制作用。本发明的阿魏菇Pleurotus ferulae lenzi抗肿瘤蛋白提取物为天然活性产物，对人类无毒副作用且对环境无污染；制备流程简单，易得，成本较低，适于工业化生产。