用于植物的自生固氮基因、固氮酶表达盒、其制备方法及应用，通过合成生物学，将类芽胞杆菌属固氮基因簇的固氮酶相关基因按植物表达模式进行特定的优化设计，获得自生固氮基因，利用CaMV35SΩ启动子控制所有优化后固氮基因的表达，构建成植物组成型表达单元，通过同尾克隆，将所有表达单元组装在一个植物表达载体中，获得的固氮酶表达盒中各表达单元连接稳定，不易断裂，将其转化到植物细胞内，使固氮酶在细胞质中表达，培育出能够将氮气转化为氨的植物，实现植物的自生固氮。