本发明提供一种呼吸道病原体核酸检测试剂盒，所述试剂盒包括以下各组分：SARS-CoV-2病毒核酸检测试剂、甲型流感病毒核酸检测试剂和乙型流感病毒核酸检测试剂，所述SARS-CoV-2病毒核酸检测试剂是用于检测SARS-CoV-2病毒的ORF1a和/或S基因的试剂；所述试剂盒是多重PCR扩增试剂盒，在一次多重PCR扩增中完成上述三种病毒检测。本发明提供一种具有通量高，操作简单，灵敏度高的试剂盒，用于鉴别是否为流感病毒感染或新型冠状病毒肺炎，实现对呼吸道病原体的快速准确检测，在SARS-CoV-2及流感病毒感染的临床诊断、监测、防控方面具有较大应用前景。