本发明公开了一种生物催化制备(R)‑4‑氯‑3‑羟基丁酸乙酯的方法，属于生物技术领域，通过酮还原酶突变体能将4‑氯乙酰乙酸乙酯转化生成(R)‑4‑氯‑3‑羟基丁酸乙酯，酮还原酶突变体源于Meyerozyma guilliermondii的野生型酮还原酶，与野生型序列相比具有更高的醇脱氢酶活性，该酮还原酶突变体的序列为SEQ ID NO.4。本发明整个体系使用单酶或双酶催化，使用葡萄糖或醇类用于辅酶循环，底物浓度高达120g/L‑200g/L，手性纯度大于99％，底物用量/NAD用量高达3017∶1，辅酶循环次数高，有效的扩大了下游应用范围。