本发明公开了一种多重RT‑PCR同时检测四种番茄病毒的方法，属于植物病毒检测技术领域。本发明根据TMV、ToMV、ToBRFV和TSWV全基因组序列的差异设计了4对特异性引物，建立了四重RT‑PCR检测体系，其检测的特异性强，DNA扩增片段的大小适宜，不同种类的病毒所对应的扩增产物的电泳条带之间有一定的距离，多重PCR结果一目了然，容易辨认特异性条带所对应的病毒。其检测的灵敏度高，TMV、ToMV、ToBRFV或TSWV的特异性引物均可检测出0.02pg的质粒模板(对应的拷贝数为1.8×103)以及0.2ng番茄植物样品，完全可满足常规番茄样品的检测；本发明的检测体系对指导四种病毒的早期检测和防控有积极作用。