本发明公开了一种检测二氧化硫衍生物的比率荧光探针是由能量供体3-(吡啶-4-基)-6-(N,N-二乙基)-香豆素、能量受体(E)-2-(3-氰基-4-(4-(二取代氨基)苯乙烯基)-5,5-二甲基呋喃-2(5H)-亚基)丙二腈和链接基团乙酰基哌嗪构成；其化学结构如式(I)所示。本发明的探针可以选择性地检测HSO3-/SO32-，随着HSO3-/SO32-浓度的增加，其荧光发射强度在568nm处逐渐增强，在648nm处逐渐减弱；两个荧光发射峰的比值(I568/I648)与HSO3-/SO32-浓度在一定范围内具有线性关系。此外，本发明的探针具有线粒体靶向性，实现了细胞内源性和外源性HSO3-/SO32-的检测，在工业检测和生物检测领域具有可观的应用前景。