本发明公开了一种非洲猪瘟病毒核酸试纸条检测试剂盒，其含有一种用于检测非洲猪瘟的引物组，上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；其中，上游引物标记Biotin，下游引物标记FITC。本发明通过组织裂解液直接获取病毒DNA，无需核酸抽提步骤；通过高效核酸扩增酶减少PCR反应时间；对引物进行标记，通过核酸试纸条显色方法替代核酸琼脂糖电泳显色方法。本发明建立了适合临床使用的高效、快检非洲猪瘟病毒的方法，并且与传统的琼脂糖凝胶电泳方法相比，无需任何仪器设备,操作简单，具有更高的灵敏性。