本发明公开了一种Nα-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-Nε-乙酰基-L-赖氨酸的制备方法，主要解决原工艺中的复杂性，周期长，收率低，成本高等技术问题，本发明制备方法包括以下步骤：第一步，将赖氨酸盐酸盐和铜盐反应做成赖氨酸铜络合物；第二步，将赖氨酸铜络合物和乙酰基供体反应制得Nε-乙酰基-L-赖氨酸铜络合物；第三步，将Nε-乙酰基-L-赖氨酸铜络合物脱铜得到Nε-乙酰基-L-赖氨酸水溶液；第四步，将Nε-乙酰基-L-赖氨酸水溶液和fmoc-基团的保护剂混合，在有机溶剂参与下，用碱性化合物碳酸钠水溶液调节pH值为8-9，反应制得Nα-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-Nε-乙酰基-L-赖氨酸。本发明通过合理的工艺路线的设置制备得到Nα-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-Nε-乙酰基-L-赖氨酸，适合大批量生产。