本发明公开了一种新的快速检测细菌mcr-1基因的试剂盒及其检测方法，试剂盒含有环介导等温扩增反应液的反应管，每个反应管内含有：20mM pH为8.8的Tris-HCl；0.1％Tween20；2mM的MgSO4；10mM(NH4)2SO4、50mM KCl)；1mM dNTP；1.2M betaine；8U Bst DNA聚合酶大片段；内引物FIP和内引物BIP各1.6μM；外引物F3和外引物B3各0.4μM；0.4μM环引物LB，无菌双蒸水。其方法为：步骤一、待检样品中细菌基因组DNA的提取；步骤二、使用上述的试剂盒进行检测；步骤三、呈现绿色则为细菌多粘菌素耐药基因mcr-1阳性，橙色则为阴性。有益效果：具有灵敏度高、特异性强、方便实施，成本低廉及可高通量检测等优点，可用于兽医及人医领域包括实验室、养殖场及小型动物医院现场对mcr-1基因耐药细菌快速检测。