本发明提供了从核糖霉素发酵液中提纯制备核糖霉素硫酸盐的方法，包括向核糖霉素发酵液中加入水稀释，缓加酸化剂，调节核糖霉素发酵液pH呈5.0～6.0；向核糖霉素发酵液中投入732阳离子交换树脂进行吸附至饱和状态，并抽入解吸柱，先用纯净水反洗去除杂质，然后用去离子水反洗至无氯根；用稀氨水洗涤，用氨水解吸，收集解吸液；将解吸液在搅拌浓缩，加入亚硫酸氢钠溶液及硫酸溶液，加入医用活性炭进行脱附；碳脱滤液过滤并喷雾干燥。在本发明中，通过对核糖霉素发酵液进行酸化、吸附、解吸、浓缩、成盐、碳脱、干燥，从而制备得到纯度较高的核糖霉素硫酸盐，并具有操作程序简单，重现性好的优点，可以实现工业化生产。