一株产人胃乙醇脱氢酶的工程菌及其酶的制备方法
摘要:
本发明公开了一株产人胃乙醇脱氢酶的工程菌及其酶的制备方法,属于生物技术领域。本发明根据GeneBank中人胃乙醇脱氢酶δδ‑ADH的基因序列合成目的基因,将其与表达载体pET‑32a(+)连接并转化E.coli BL21(DE3)。E.coli BL21(DE3)经异丙基硫化‑β‑D‑半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白,目的蛋白以包涵体形式存在。收集并破碎菌体后离心,取沉淀获得包涵体,用低浓度尿素溶液或其缓冲液溶解包涵体获得有活性的δδ‑ADH粗酶液。经HisTrapTM excel亲和层析柱纯化获得目的蛋白,活性在2.085U/mg以上。本发明提供的工程菌所产生的δδ‑ADH可氧化高浓度的乙醇,其在大肠杆菌中以包涵体形式存在;有活性的δδ‑ADH粗酶液只需经包涵体溶解液溶解即可获得,不需要复性操作,可节约成本、简化操作步骤,提高效率。
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