- 专利标题: 一株产人胃乙醇脱氢酶的工程菌及其酶的制备方法
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申请号: CN201610980083.4申请日: 2016-11-08
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公开(公告)号: CN106544312B公开(公告)日: 2020-02-14
- 发明人: 陆健 , 孙军勇 , 常开霞 , 蔡国林 , 李晓敏 , 吴殿辉
- 申请人: 江南大学(如皋)食品生物技术研究所
- 申请人地址: 江苏省南通市南通如皋市如城镇万寿路99号
- 专利权人: 江南大学(如皋)食品生物技术研究所
- 当前专利权人: 江南大学(如皋)食品生物技术研究所
- 当前专利权人地址: 江苏省南通市南通如皋市如城镇万寿路99号
- 代理机构: 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司
- 代理商 张勇
- 主分类号: C12N1/21
- IPC分类号: C12N1/21 ; C12N15/70 ; C12N15/53 ; A61K38/44 ; A61P39/02 ; C12R1/19
摘要:
本发明公开了一株产人胃乙醇脱氢酶的工程菌及其酶的制备方法,属于生物技术领域。本发明根据GeneBank中人胃乙醇脱氢酶δδ‑ADH的基因序列合成目的基因,将其与表达载体pET‑32a(+)连接并转化E.coli BL21(DE3)。E.coli BL21(DE3)经异丙基硫化‑β‑D‑半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白,目的蛋白以包涵体形式存在。收集并破碎菌体后离心,取沉淀获得包涵体,用低浓度尿素溶液或其缓冲液溶解包涵体获得有活性的δδ‑ADH粗酶液。经HisTrapTM excel亲和层析柱纯化获得目的蛋白,活性在2.085U/mg以上。本发明提供的工程菌所产生的δδ‑ADH可氧化高浓度的乙醇,其在大肠杆菌中以包涵体形式存在;有活性的δδ‑ADH粗酶液只需经包涵体溶解液溶解即可获得,不需要复性操作,可节约成本、简化操作步骤,提高效率。
公开/授权文献
- CN106544312A 一株产人胃乙醇脱氢酶的工程菌及其酶的制备方法 公开/授权日:2017-03-29
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