本发明公开了重组人胰岛素或其类似物的主要脱氨产物位点的鉴定方法。本发明根据重组人胰岛素及其类似物的氨基酸序列结构，采用酶切还原法将待测重组人胰岛素及类似物样品降解为小肽段，再结合LC‑MS/MS液质联用技术鉴定重组人胰岛素或其类似物的脱氨基肽段并对脱氨基位点进行精确定位。本发明鉴定方法灵敏度高、重复性好、快速简便，可准确鉴定待测重组人胰岛素或其类似物样品中主要脱氨产物的位点，为重组人胰岛素或其类似物有关物质的定性提供了一种快速、简便的鉴定方法。