本发明提供一种电化学纳米免疫传感器及其制备方法和应用。所述传感器以海藻酸钠为桥联剂将纳米金和辣根过氧化物酶固定于电极表面，所述纳米金吸附有抗谷胱甘肽硫转移酶抗体。所述制备方法包括步骤：(1)对电极进行预处理，然后在电极上包被由海藻酸钠溶液、纳米金溶胶和辣根过氧化物酶溶液组成的混合溶液；(2)继续在电极上包被抗谷胱甘肽硫转移酶抗体；(3)封闭液封闭后即得。本发明的电化学纳米免疫传感器不受样品的浊度、颜色的影响，无需对样品进行纯化、富集等预处理，操作简单，检测灵敏度高、特异性强，能够用于对谷胱甘肽硫转移酶进行快速定量检测，具有良好的应用前景。