本发明公开了一种羟丙基壳聚糖取代度的测定方法，包括：⑴干燥羟丙基壳聚糖样品。⑵建立检测模型：a.利用红外吸收光谱仪得到上述样品的红外吸收光谱图；b.测得甲基特征峰1460‑1456cm‑1的峰面积的吸光度值A1，以整个波形1530‑1215cm‑1的波谷连线为基线，以甲基特征峰的右侧波谷为横向边界；测得酰胺特征峰1660‑1640cm‑1的面积的吸光度值A2，以该峰的波谷连线为基线；A1与A2的比值为X；c.以标准方法测得羟丙基壳聚糖样品的取代度Y；d.以Y对X建立线性模型Y＝kX+b，从而获得模型中k和b的具体数值。⑶将经过干燥的待测样品通过红外吸收光谱图得到的比值X代入上述线性回归模型，即可通过计算得到取代度Y。该方法简便快捷、准确，无须精密称量和溶解样品。