本发明涉及生物样品中夹竹桃苷和夹竹桃苷乙的液相色谱?串联质谱检验方法，包括如下步骤：取液体样品或组织样品剪碎于具塞试管中；取上述制备好的样品，加入的乙酸乙酯两次，每次振荡10min，离心10min，合并两次有机相，空气浓缩仪上浓缩至0.5mL，过0.22μm微孔有机滤膜，滤液供液相色谱?串联质谱仪分析。本发明的检测方法简单高效、快速灵敏、准确度高，具有广泛的实用性，能够应用于生物样品中夹竹桃苷和夹竹桃苷乙的定性定量检验，以及适用于体外样品和可疑物证的检验。